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染料法PCR试剂盒

更新时间:2020-04-23

简要描述:

染料法PCR试剂盒 即 肺炎支原体荧光定量PCR检测试剂盒(染料法),可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。

染料法PCR试剂盒 即 肺炎支原体荧光定量PCR检测试剂盒(染料法)

DNA提取:
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。
结果判定
在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明贝氏柯克斯体核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明贝氏柯克斯体核酸阴性。
如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行贝氏柯克斯体 qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明贝氏柯克斯体核酸阳性;否则判为样本阴性。
染料法PCR试剂盒注意事项:
初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
所有使用的离心管zuì好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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